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激(jī)光共(gòng)聚焦熒(yíng)光顯微鏡 活體(tǐ)熒光(guāng)物質(zhì)檢查
激光共(gòng)聚(jù)焦(jiāo)顯(xiǎn)微(wēi)鏡,簡稱CLSM(Confocal Laser Scanning Microscopy),是(shì)一種利(lì)用(yòng)激(jī)光共振效(xiào)應進行成(chéng)像(xiàng)的顯(xiǎn)微鏡(jìng)。它通(tōng)過(guò)使用(yòng)激(jī)光束掃描(miáo)樣品的(dí)不(bù)同(tóng)層麵(miàn),將(jiāng)所得(dé)到的(dí)圖像(xiàng)合成(chéng)成(chéng)一幅清晰(xī)的三(sān)維(wéi)圖像(xiàng)。與傳(chuán)統顯微(wēi)鏡(jìng)相比,激光(guāng)共聚焦顯微鏡具有更高(gāo)的分辨率和(hé)更(gēng)強的穿(chuān)透能力(lì),可(kě)以(yǐ)觀察到(dào)更(gēng)加細微的(dí)結(jié)構和(hé)更深層次的物質(zhì)。
在活(huó)體(tǐ)熒光物質(zhì)的檢查中,激光共(gòng)聚(jù)焦顯(xiǎn)微鏡(jìng)發(fā)揮了(liǎo)重(zhòng)要的(dí)作用(yòng)。通過標記(jì)活體細(xì)胞(bāo)或(huò)組織的特定結構(gòu)或分子(zǐ),激(jī)光共聚焦(jiāo)顯(xiǎn)微鏡(jìng)可(kě)以(yǐ)實時觀(guān)察(chá)到這些結構(gòu)或(huò)分(fēn)子的(dí)活動(dòng)和分布情(qíng)況。
在生物(wù)醫學領(lǐng)域,它可以(yǐ)用於(yú)觀(guān)察細(xì)胞的(dí)生(shēng)長,分裂和死亡過程(chéng),研究細胞信號傳導和(hé)分(fēn)子(zǐ)交互作用(yòng)等(děng)。在藥物研(yán)發中,它可(kě)以用於觀察藥(yào)物(wù)在(zài)活體細(xì)胞或組織中的分布(bù)情(qíng)況,評估(gū)藥物的療效和(hé)毒性(xìng)。此(cǐ)外(wài),在神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域,激光共聚焦(jiāo)顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)可(kě)以(yǐ)用於(yú)觀察(chá)神經元(yuán)的活動(dòng)和連接,揭示(shì)大(dà)腦的工作機製。
較(jiào)寬(kuān)場(cháng)熒光(guāng)顯(xiǎn)微鏡的優點:
l 能夠通過熒光標(biāo)本連(lián)續生(shēng)產(chǎn)薄(0.5至(zhì)1.5微(wēi)米)的光學切(qiē)片,厚(hòu)度(dù)範圍可(kě)達50微米(mǐ)或(huò)更(gēng)大(dà)。(主(zhǔ)要優(yōu)點)
l 控製景深的能(néng)力。
l能夠從樣品(pǐn)中分離(lí)和(hé)收(shōu)集(jí)焦平(píng)麵,從(cóng)而消(xiāo)除熒光樣品(pǐn)通常看到的(dí)焦(jiāo)外(wài)“霧(wù)霾(mái)",非共(gòng)焦熒光顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)下(xià)無(wú)法檢(jiǎn)測到。(最重要的特(tè)點)
l 從厚試(shì)樣(yàng)收(shōu)集(jí)連續(xù)光學切片的能(néng)力。
l 通過(guò)三維物(wù)體收集一(yī)係(xì)列圖像(xiàng),用於二維(wéi)或(huò)三維重(zhòng)建。
l收(shōu)集雙(shuāng)重和三(sān)重標簽,精(jīng)確的共定位。
l 用於(yú)對在不透(tòu)明的(dí)圖案化基(jī)底(dǐ)上(shàng)生長的熒光(guāng)標(biāo)記細胞之(zhī)間的(dí)相互作(zuò)用進(jìn)行(háng)成像。
l 有能力補償(cháng)自發熒(yíng)光。
耐(nài)可(kě)視共聚(jù)焦成(chéng)像效(xiào)果(guǒ)圖 尼康(kāng)共聚(jù)焦成(chéng)成像效(xiào)果圖(tú)
應(yīng)用(yòng),共(gòng)聚(jù)焦顯(xiǎn)微鏡(jìng)在(zài)以(yǐ)下(xià)研究領(lǐng)域中(zhōng)應(yīng)用(yòng)較為(wéi)廣(guǎng)泛:
1,細胞生(shēng)物(wù)學:細(xì)胞(bāo)結(jié)構,細(xì)胞骨架(jià),細胞(bāo)膜(mó)結(jié)構(gòu),流(liú)動(dòng)性,受體,細(xì)胞器結構和(hé)分布(bù)變化,細胞凋亡;
2,生物(wù)化學:酶(méi),核(hé)酸,FISH,受體分析
3,藥理學(xué):藥物對細(xì)胞的作用(yòng)及(jí)其動力(lì)學(xué);
4,生(shēng)理學(xué):膜(mó)受(shòu)體,離(lí)子(zǐ)通道,離(lí)子(zǐ)含(hán)量(liáng),分布,動(dòng)態(tài);
5,遺傳學和組胚(pēi)學(xué):細胞生長(cháng),分化(huà),成熟(shú)變化,細(xì)胞的三維(wéi)結(jié)構,染(rǎn)色(sè)體分析,基因表達,基(jī)因診(zhěn)斷;
6,神經生(shēng)物學:神(shén)經細(xì)胞(bāo)結構,神經遞質的(dí)成(chéng)分,運(yùn)輸和(hé)傳(chuán)遞;
7,微生物學(xué)和寄生(shēng)蟲學(xué):細(xì)菌(jūn),寄(jì)生蟲(chóng)形(xíng)態結構;
8,病(bìng)理學(xué)及病(bìng)理學(xué)臨(lín)床應(yīng)用:活(huó)檢標本(běn)的快速診(zhěn)斷(duàn),腫(zhǒng)瘤診斷,自身免疫性(xìng)疾病的診斷(duàn);
9,生物(wù)學,免疫學,環(huán)境醫學和營養學(xué)。
NCF950激(jī)光共(gòng)聚焦顯微(wēi)鏡配(pèi)置(zhì)
NCF950激光(guāng)共(gòng)聚焦配置(zhì)表(biǎo) | |
激光(guāng)器(qì) | 激光405 nm,488 nm,561 nm,640 nm |
探測器 | 波(bō)長:400-750nm,探(tàn)測(cè)器:3個獨(dú)立(lì)的(dí)熒(yíng)光檢測(cè)通道;1個DIC透(tòu)射(shè)光檢測通(tōng)道 |
掃(sǎo)描頭(tóu) | 最大像素(sù)大小:4096 x 4096 掃描(miáo)速(sù)度:2 fps(512 x 512像(xiàng)素,雙向),18 fps(512 x 32像(xiàng)素(sù),雙向),圖像旋(xuán)轉: 360° |
掃描(miáo)模式(shì) | X-T, Y-T, X-Y, X-Y-Z, X-Y-Z-T |
針孔(kǒng) | 無級(jí)變速(sù)六邊形(xíng)電(diàn)動(dòng)針孔(kǒng);調(tiáo)節範圍:0-1.5毫(háo)米 |
共焦視場 | φ18mm內接正方(fāng)形 |
圖像位深 | 12bits |
配(pèi)套顯(xiǎn)微鏡 | NIB950全(quán)電動倒(dǎo)置(zhì)顯微鏡 |
光(guāng)學係統(tǒng) | NIS60無限遠光(guāng)學係(xì)統(tǒng)(F200) |
目鏡(jìng)(視(shì)野(yě)) | 10×(25),EP17.5mm,視度可調(tiáo)-5~+5,接口Φ30 |
觀察(chá)鏡(jìng)筒 | 鉸鏈式三目觀察(chá)鏡筒(tǒng),45度傾(qīng)斜,瞳距47-78mm,目(mù)鏡接(jiē)口Φ30,固定視(shì)度;1)目/攝(shè)切換:(100/0,50/50,0/100);2)目視(shì)/關(guān)閉目(mù)視/可(kě)調焦(jiāo)勃(bó)氏鏡 |
NIS60物鏡 | 10×復(fù)消色(sè)差(chà)物鏡(jìng),NA=0.45 WD=4.0 蓋玻片=0.17 |
20×復消(xiāo)色(sè)差物鏡,NA=0.75 WD=1.1 蓋玻(bō)片=0.17 | |
60×半(bàn)復(fù)消色差(chà)物鏡,NA=1.40 WD=0.14 蓋玻片(piàn)=0.17 油(yóu)鏡 | |
100×復消色差物鏡,NA=1.45 WD=0.13 蓋(gài)玻(bō)片=0.17 油鏡 | |
物鏡(jìng)轉(zhuǎn)換(huàn)器 | 電動六孔(kǒng)轉(zhuǎn)換(huàn)器(擴展(zhǎn)插(chā)槽),M25×0.75 |
聚光鏡 | 6孔位電動(dòng)控(kòng)製(zhì):NA0.55,WD26;相(xiāng)襯(10/20,40,60選配) |
DIC(10X,20X/40X)選配.空(kōng)孔 | |
照(zhào)明(míng)係(xì)統 | 透(tòu)射柯(kē)拉照明,10W LED照明(míng); |
落射照明:寬(kuān)場光(guāng)纖照明 | |
中(zhōng)間倍率(shuài)切(qiē)換 | 手動(dòng)1X,1.5X,共焦(jiāo)切換 |
機身(shēn)端口(kǒu) | 分光比(bǐ): |
左側:目視=100:0;右側:目(mù)視=100:0; | |
平台(tái) | 電動控製:行程範圍130 mm x100 mm (台麵325 mm x 144 mm )最(zuì)大(dà)速度(dù):25mm/s;分辨(biàn)率:0.1μm - 重復(fù)精度:3μm。機(jī)械(xiè)可調樣品夾(jiā)板(bǎn) |
調焦係(xì)統(tǒng) | 同軸(zhóu)粗微動(dòng)升降機(jī)構,行程:焦(jiāo)點(diǎn)上(shàng)7下(xià)2;粗調2mm/圈,微調(tiáo)0.002mm/圈(quān);可手動(dòng)和電(diàn)動(dòng)控(kòng)製(zhì),電動(dòng)控(kòng)製時(shí),最(zuì)小步(bù)進(jìn)0.01um; |
DIC插(chā)板 | 10X,20X,40X插(chā)板;可(kě)放置於轉換(huàn)器插槽(cáo);選(xuǎn)配 |
控製 | 搖杆,控製(zhì)盒,USB連(lián)接綫(xiàn) |
軟(ruǎn)件(jiàn) | 軟件(jiàn):NOMIS Advanced C |
