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熒(yíng)光顯(xiǎn)微鏡(jìng)的介紹——熒光顯(xiǎn)微鏡(jìng)的(dí)明暗場(cháng)成像原(yuán)理和濾色片(piàn)選用(yòng)

更新時間:2022-09-09      點擊(jī)次(cì)數(shù):5675

熒(yíng)光顯微(wēi)鏡根(gēn)據(jù)襯(chèn)度形(xíng)成(chéng)的(dí)機製,對(duì)散(sàn)射(shè)吸收像可(kě)以有(yǒu)兩種成(chéng)像方式:

明(míng)場成像(xiàng)法(BFI):選用單一(yī)透(tòu)射束形成的衍(yǎn)射(shè)襯(chèn)度像(xiàng),亮背景上的(dí)暗圖(tú)形(xíng)像(xiàng),像(xiàng)清(qīng)晰。物鏡光(guāng)闌(lán)的(dí)孔越小(xiǎo),明場像(xiàng)的(dí)襯(chèn)度(dù)越(yuè)大(dà)。

暗場成像法(DFI):選(xuǎn)用單(dān)一衍射(shè)束形(xíng)成(chéng)的(dí)衍射襯度(dù)像(xiàng),暗(àn)背(bèi)景(jǐng)上的(dí)亮(liàng)圖形像(xiàng),像(xiàng)有畸變。這種暗場成(chéng)像法(fǎ)可(kě)以提高(gāo)圖像(xiàng)的襯(chèn)度(dù)。

熒(yíng)光(guāng)顯微鏡(jìng)濾色片(piàn)的(dí)選用:

濾色片是(shì)熒光顯(xiǎn)微鏡的(dí)關鍵部件, 在熒光(guāng)顯微鏡中按(àn)其(qí)功(gōng)能可(kě)分為激(jī)發濾(lǜ)色片和截(jié)止濾色片(piàn)兩類(lèi)。激發(fā)濾(lǜ)色片(piàn)的功(gōng)能是從光源中(zhōng)分析出所需的(dí)特定(dìng)光(guāng)譜(pǔ), 以(yǐ)激發標本產生熒光。截(jié)止(zhǐ)濾色片的(dí)功(gōng)能是僅把標本(běn)上發出的(dí)熒光透(tòu)過(guò)成(chéng)像, 而將(jiāng)其它(tā)光(guāng)阻擋不參與成(chéng)像, 一般激發濾(lǜ)色片(piàn)安置(zhì)在(zài)緊靠光(guāng)源, 而截止濾色片在物(wù)鏡與目鏡之間(jiān)。

目前使用較多(duō)的(dí)濾色(sè)片是色玻璃(lí)和幹(gān)涉濾(lǜ)色(sè)片, 色(sè)玻璃(lí)大都屬寬波帶濾色片, 透(tòu)過波段寬(kuān), 透過(guò)率(shuài)隨厚(hòu)度而降低, 價(jià)格(gé)相對低廉。由於色玻(bō)璃與(yǔ)空(kōng)氣(qì)的(dí)界麵上, 約(yuē)有4% 光(guāng)綫被反射掉, 玻(bō)片(piàn)愈(yù)多, 光(guāng)能損(sǔn)失愈(yù)大, 限製了(liǎo)它(tā)的(dí)使用(yòng)性能。幹(gān)涉濾色片(piàn)的出現, 可(kě)按需要製成能透(tòu)過或截(jié)止(zhǐ)一(yī)定(dìng)波(bō)段(duàn)的濾(lǜ)色片(piàn), 從(cóng)而促(cù)使熒光顯微術的(dí)進展(zhǎn), 現代(dài)技(jì)術(shù)上已能對某波段的透(tòu)射率或反(fǎn)射(shè)率(shuài)進行控製(zhì)。

熒光顯微鏡(jìng)根據(jù)結構組成部(bù)分可(kě)以分(fēn)成兩種(zhǒng)不同(tóng)類型(xíng)的(dí)熒(yíng)光(guāng)顯微鏡:

透(tòu)射(shè)式熒(yíng)光顯微鏡,它和(hé)普通(tōng)光學顯微(wēi)鏡(jìng)類(lèi)似,光源是從鏡(jìng)座(zuò)出發(fā)經過聚(jù)光鏡(jìng)到(dào)達樣品(pǐn)激發(fā)熒光後通(tōng)過物鏡(jìng),最(zuì)後到(dào)達(dá)目(mù)鏡。

落射(shè)式熒光顯微鏡,也是常(cháng)見的熒光顯(xiǎn)微鏡,它的光(guāng)源是通過物(wù)鏡(jìng)落(là)到樣品上,激發熒(yíng)光(guāng)以(yǐ)後再(zài)發(fā)射(shè)回物鏡,最後到達(dá)目(mù)鏡。

透射式熒光(guāng)顯微鏡和落(là)射(shè)式熒(yíng)光(guāng)顯微鏡(jìng),它們的(dí)光源都要(yào)經過激發濾色鏡過,濾掉(diào)一部分的可(kě)見光,但(dàn)是它(tā)們的光源來源(yuán)相反,透(tòu)射式(shì)熒光顯(xiǎn)微鏡光(guāng)源來(lái)源(yuán)於(yú)下方(fāng),而落射式(shì)熒光(guāng)顯微鏡則(zé)是(shì)上方,具(jù)有分(fēn)光鏡(jìng)的(dí)功能(néng),可以觀察透明(míng)和不透明(míng)的被檢物(wù)體(tǐ),突破透射式熒光顯(xiǎn)微鏡的局(jú)限性,因此(cǐ)隨(suí)著(zhuó)技(jì)術(shù)不斷進步(bù),落(là)射(shè)式熒(yíng)光顯微(wēi)鏡(jìng)逐漸替(tì)代落射(shè)式(shì)熒光顯微(wēi)鏡。

 

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