熒(yíng)光顯微鏡(Fluorescence microscope) : 熒(yíng)光(guāng)顯微鏡是以紫外(wài)綫為光源(yuán), 用(yòng)以照射(shè)被(bèi)檢物(wù)體(tǐ), 使之(zhī)發出(chū)熒光(guāng), 然(rán)後(hòu)在(zài)顯微鏡下觀(guān)察(chá)物體的形狀及其所在(zài)位置(zhì)。
熒(yíng)光(guāng)顯微鏡用(yòng)於研(yán)究細胞內物質(zhì)的(dí)吸(xī)收,運(yùn)輸,化(huà)學(xué)物質的(dí)分(fēn)布及(jí)定位(wèi)等。 細(xì)胞中(zhōng)有些物質,如葉(yè)綠(lǜ)素等,受(shòu)紫(zǐ)外綫照射(shè)後可(kě)發熒(yíng)光;另(lìng)有(yǒu)一(yī)些物質本身雖(suī)不(bù)能(néng)發熒光,但如(rú)果用熒(yíng)光(guāng)染料或(huò)熒光(guāng)抗體(tǐ)染色(sè)後(hòu),經(jīng)紫外綫照(zhào)射亦可發熒光,熒光顯(xiǎn)微(wēi)鏡就是對(duì)這(zhè)類(lèi)物(wù)質進(jìn)行定(dìng)性和定(dìng)量研究(jiū)的(dí)工具(jù)之(zhī)一。
熒(yíng)光的(dí)原理是(shì)某些(xiē)物(wù)質(zhì)會(huì)在高強(qiáng)度的短(duǎn)波長光(guāng)綫(xiàn)照(zhào)射(shè)下,會發(fā)出(chū)波長稍長的發射光(guāng)(熒光(guāng))。
而我們一(yī)般都(dū)是(shì)觀察(chá)被激發(fā)熒(yíng)光基團所(suǒ)發(fā)射(shè)出來的(dí)波(bō)長(cháng)稍長(cháng)的發射光(熒光(guāng))。
但是激(jī)發(fā)的光(guāng)會很(hěn)強,所以(yǐ)我(wǒ)們(mén)就需要(yào)把激發(fā)的光全部(bù)濾(lǜ)去,這樣(yàng)才(cái)可以(yǐ)看到(dào)熒光(guāng)基(jī)團的發射(shè)光(guāng)(熒光)。
熒(yíng)光(guāng)顯(xiǎn)微鏡一般(bān)都用高(gāo)強(qiáng)度的(dí)汞(gǒng)燈(dēng)做激(jī)發(fā)光源(yuán)。使用濾(lǜ)色片(piàn)把(bǎ)不(bù)需要的光濾(lǜ)去,隻留下激發熒光集團(tuán)的高強度(dù)很純的(dí)光綫。這個單色(sè)的(dí)光綫通過物鏡(jìng)照(zhào)射到樣(yàng)本(běn)上之後,樣本(běn)會(huì)被(bèi)激發(fā)出(chū)發射光(guāng)(熒(yíng)光(guāng)),熒光和激(jī)發光都(dū)會沿著物鏡光路(lù)返回,這(zhè)樣(yàng)的(dí)話(huà),就(jiù)需要用(yòng)一個二相(xiāng)色(sè)鏡把激發光濾去(qù),隻讓我們(mén)需要(yào)看到的熒光透(tòu)過。
這(zhè)個熒光沿著顯(xiǎn)微(wēi)鏡的光(guāng)路(lù)*後(hòu)到達目鏡下,然後進(jìn)入(rù)我們的眼(yǎn)睛,我們就(jiù)可(kě)以(yǐ)看到(dào)熒(yíng)光基團所發出來的(dí)熒光了(liǎo)。
注(zhù):在熒(yíng)光顯(xiǎn)微(wēi)鏡(jìng)中(zhōng),核(hé)心(xīn)的(dí)是 1 熒(yíng)光光(guāng)源(yuán),因(yīn)為(wéi)熒(yíng)光(guāng)需要高強(qiáng)度(dù)的(dí)光才可(kě)以被(bèi)激發出來(lái),我(wǒ)們一般(bān)都(dū)用汞燈(dēng),另外(wài)還有(yǒu)長(cháng)壽(shòu)命金屬(shǔ)鹵素(sù)燈,當然還(huán)有激光。2 激發塊(幾個濾色(sè)塊組成的(dí)組件,一(yī)般(bān)有(yǒu)激發(fā)光(guāng)濾(lǜ)色(sè)片,二相色鏡,發射(shè)光(guāng)濾色片(piàn)),因為我們(mén)的熒光基(jī)團(tuán)都(dū)是(shì)在特定(dìng)波(bō)長的(dí)光(guāng)綫下(xià)才可以激(jī)發(fā),並且被(bèi)激發的(dí)發(fā)射(shè)光(guāng)也具有(yǒu)特(tè)定波(bō)長。所(suǒ)以需要選(xuǎn)擇合適(shì)的(dí)激(jī)發塊(主要是(shì)選擇激(jī)發(fā)光濾(lǜ)色片,二相色鏡(jìng),發(fā)射(shè)光(guāng)濾(lǜ)色片這(zhè)三(sān)個(gè)的可以(yǐ)通(tōng)過(guò)的光綫(xiàn)波長等參(cān)數)。
另(lìng)外(wài)物鏡(jìng)也對(duì)熒光(guāng)顯(xiǎn)微(wēi)鏡有(yǒu)很大(dà)影響(xiǎng)。因為隻有高(gāo)檔次的(dí)物(wù)鏡才可以提供(gōng)完好的色差矯(jiǎo)正(zhèng)。